第三部分
3.?化妆品视角下靶向表皮葡萄球菌和痤疮丙酸杆菌皮肤菌群的评价方法
目前，针对化妆品应用，几种评价方法正在开发中，如体外法、离体法和体内法。体外法和离体法用于化妆品成分活性的筛选评估，体内法用于含有活性成分的化妆品的评估。
化妆品成分的活性可以通过针对共生或致病性细菌(如表皮葡萄球菌或痤疮丙酸杆菌)来进行评估,可评估其生长动力学、细胞粘附、细胞侵袭、生物膜产生、细胞毒性、毒力和群体感应。必须建立体外共培养定植模型用于评估(1)化妆品成分对皮肤菌群的活性;(2)菌群与皮肤之间的相互作用。
表皮分化标志物，如丝聚蛋白、整合素或角蛋白，以及炎症标志物，如TLRs、AMPs或细胞因子，是与菌群相关的皮肤评估的重要目标。最近的研究已经开发出在单一培养或3D皮肤模型上整合细菌、酵母菌甚至全皮肤菌群的能力，以评估化妆品成分。新的体外和离体的化妆品评估模型，必须将从人类供体收集到的未选择的皮肤菌群，共生菌和/或致病菌整合到补充了免疫细胞的3D皮肤模型中。
在化妆品应用的体内临床研究中，紧随其后的是应根据细菌多样性和相对丰度评估全部或部分皮肤微生物组。这些微生物组分析通常与常见的体内特性评估一起完成，如水合作用、皮肤发红、弹性、微缓解和皮脂水平，仅进行相关性分析。
3.1.?皮肤微生物组和微生物群的评价
细菌是目前皮肤微生物群研究设计的主要焦点。细菌的鉴定和分类通常根据其小亚基16S核糖体RNA基因(16SrRNA)，包括保守区和可变区。该基因在不同物种之间普遍存在且高度保守[]。体内化妆品评价方法依赖于化妆品在人体上的应用，其次是对细菌多样性的评价。无皮肤系统活性成分的体外分析主要针对单一培养或共培养菌株的细菌生理学。临床测试似乎是最终化妆品评估中最现实、最准确的方法，因为样品直接来自专门小组成员。但是，在宏基因组学、宏蛋白质组学和/或代谢组学研究中需要大数据分析，耗时、费钱且复杂。个体皮肤采样可以通过各种技术进行:通过表面刮拭、皮肤拭子和胶带剥离进行无创采集，或通过皮肤活检进行有创采集[,]。最常用的采样方法是用含0.9%氯化钠和0.1%Tween-20的预湿棉签擦拭皮肤。拭子的结果取决于取样的条件，如擦拭的次数和擦拭的压力。在VanHorn等()的研究中，植绒的ESwabTM似乎是最有效的拭子试验[]。胶带剥离法使用胶带，从角质层和深层厌氧区收集到的活菌比拭子法更多[,]。皮肤活检通常用于分析毛囊，收集表层需氧菌和深层皮肤厌氧菌[84]。最近一项使用16SrRNA基因测序的研究表明，在16例患者中，从非炎症性皮肤拭子和活检中观察到的微生物组在多样性和分类组成上都存在差异[]。由于内部和外部因素的可变性，取样方法的选择并不是影响皮肤微生物组/微生物群研究的唯一因素。事实上，许多其他的因素都应该包括在研究中，如性别、药物治疗中抗生素的使用、年龄、饮食、民族、季节等，以及进行取样的身体区域。采样完成后，先进行微生物细胞裂解提取DNA，再进行纯化和表征。然后用PCR扩增16SrRNA+分析区(V1-V3)[]。qPCR，更准确的说是单叠氮丙啶的PCR，可以区分活菌和死菌，还能量化收集的活菌[]。继而进行测序，与数据库进行比较[]。通过DNA测序，通常可以鉴定死亡细菌、非代谢活性细菌或游离DNA[4]。然而，一种名为mRNA测序的新的宏转录组学技术只